用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理？
Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂
Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
抽提RNA的使用目的
RNA用于不同的后续实验，其质量要求不尽相同。
cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；
Northern对RNA完整性要求较高，对酶反应抑制物残留要求较低；
RT-PCR对RNA完整性要求不太高，但对酶反应抑制物残留要求严格。因此，明确实验目的是进行后续实验的首要条件。
提取RNA过程中为什么要严格控制时间，温度，PH值
- if(keypress==true)检测有键按下 {delay_us(50); 延迟50us，软件滤波防抖动 if(keypress==true) 检测有键被按下 key_value=P1;提取键值 {switch(key_value) 识别是那个键被按下了 case 0x01: XXX；break; 发浮篡簧诂毫磋桐单昆 case 0x02:XXX;BREAK;进入对应工步或者动作即可。 …… } } }
提取RNA过程中为什么要严格控制时间，温度，PH值
- if(keypress==true)检测有键按下 {delay_us(50); 延迟50us，软件滤波防抖动 if(keypress==true) 检测有键被按下 key_value=P1;提取键值 {switch(key_value) 识别是那个键被按下了 case 0x01: XXX；break; 发浮篡簧诂毫磋桐单昆 case 0x02:XXX;BREAK;进入对应工步或者动作即可。 …… } } }
从细胞中提取mrna时，为什么常用oligo纤维粉
- 你说的是OligodT吧，因为一个片段如果能够被转录必须要有转录起始位点和转录的终点ployA，而OligodT则是末端含有ployT的随机引物，这就肌发冠菏攉孤圭酞氦喀使得随机引物可以和任意的mRNA末端结合从而逆转录出完整的mRNA。
从细胞中提取mrna时，为什么常用oligo纤维粉
- 你说的是OligodT吧，因为一个片段如果能够被转录必须要有转录起始位点和转录的终点ployA，而OligodT则是末端含有ployT的随机引物，这就肌发冠菏攉孤圭酞氦喀使得随机引物可以和任意的mRNA末端结合从而逆转录出完整的mRNA。
RNA提取及电泳求助
- 静躺几十分钟后打嗝停止，但稍微活动又会打嗝是什么原因？
